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一招解決:細胞培養基混用問題

更新時間:2022-06-28  |  點擊率:713

可否使用不同的培養基?

對于購買的商品化細胞來說,產品目錄或者細胞說明書上所推薦的培養基,一般是細胞株的原始提供者推薦的培養基,或者是經過驗證的最利于該細胞株生活的培養基。其他培養基存在一定培養風險。因此,應謹慎更換培養基,一定要更換,推薦實驗前預先保留一份細胞種。

更換培養基有兩種方法:

1、直接更換,強制使細胞適應新的培養基;

2、還有一種更溫和的方法,傳代細胞的時候,將新培養基與原推薦使用的培養基1:1混合,并另外分出一板細胞,用原先推薦的培養基。傳代后仔細觀察細胞的生長狀態,如果混合培養基培養的細胞生長狀態不好,應立即停止更換培養基。若生長狀態好,可以繼續傳代分瓶,一板保留原推薦培養基,另外一板新培養基與原推薦使用的培養基3:1混合,繼續觀察,如果細胞狀態好,可以全部換成新鮮的培養基。


Vol.2

細胞株的污染鑒定、預防和處理問題

普通微生物污染:培養基渾濁,高倍鏡觀察有微生物污染;按規定棄用并全面嚴格滅菌。

支原體污染:顯微鏡很難直接觀察,細胞通常表現為細胞生長緩慢,有細胞漂浮等等,可通過MB Venor®Gem qEP試劑盒,進行支原體檢測。如發現支原體污染,應按規定棄用,實驗室要及時全面消毒滅菌,防止蔓延,推薦使用MB Mycoplasma-off™對細胞培養環境進行清理 ,使用Water Shield™對水槽進行清潔、預防處理。如果細胞株珍貴,可用MB相關支原體祛除試劑Mynox®、Mynox® Gold、Zell Shield®對細胞進行處理。


Vol.3

如何挑選胎牛血清?

細胞要養好,需要選擇品質優異的血清,如Ausbian®進口特級胎牛血清,它適合各種細胞培養,尤其適合難養細胞,如:干細胞、肝細胞,神經細胞,原代培養、細胞融合、轉染細胞等。


WHO公布的《用動物細胞體外培養生產生物制品規程》中的要求:

1、牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家,并應具備適當的監測系統。

2、有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動物蛋白飼料的牛群。

3、證明所用牛血清中不含對所生產疫苗病毒的抑制物。

4、血清要通過濾膜過濾除菌,保證無菌。

5、無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國家要求無細菌噬菌體污染。

6、對細胞有良好的支持繁殖作用。


我國對牛血清的質量中提出比較嚴格的標準要求:

包括蛋白質含量,細菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細菌內毒素,支持細胞增殖檢查。一款來自澳洲的Ausbian®胎牛血清在市場上頗受歡迎。它具有精選內毒素極低、產量充足的血清批次,滿足干細胞、基因敲除、原代培養、細胞典藏、長期傳代等各類細胞的培養要求;澳洲血源,完整的檢測報告及滅病毒服務,為各類臨床相關項目的申報提供完整支持等特點。


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