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「細胞質控」助力高質量細胞培養——Ausbian特級胎牛血清

更新時間:2022-11-30  |  點擊率:753

人有生老病死,細胞也是如此。在細胞體外培養過程中,細胞的活力和狀態是處于一種動態變化的狀態。

脫離機體保護的細胞,往往是很脆弱的,在體外環境中生長,培養條件的輕微改變,或許就會令細胞發生不可預估的變化。就比如,常見的原代細胞培養過程中,即使保持培養條件并未發生改變,但在傳代過程中,細胞質量也經常是呈下降趨勢的。

細胞質量改變,勢必會影響實驗結果。因此,對細胞質量進行適當的監控,有助于掌握細胞狀態,對其能否進行后續實驗做出合理的預判。

細胞質控

傳統的細胞培養,主要是通過在顯微鏡下,觀察細胞的形態學變化,以及傳代培養周期的變化,來判斷細胞狀態。這種判斷方法雖然便捷,但是由于比較主觀,誤差較大,也無法量化,或是進行統計學分析。

體外細胞的有效培養新概念——“細胞質控",可以通過細胞活力、細胞凋亡、細胞周期、細胞增殖及DNA損傷等五方面對細胞生長生存狀態進行全面的監控。

在體外細胞培養的過程中,細胞總有一些因各種原因而死亡,總細胞中活細胞所占的百分比,即是我們常說的細胞活力。細胞活力是“細胞質控"中比較基礎的指標。常見的流式細胞設備及部分細胞計數儀器都可以對細胞進行計數,也可以提供準確客觀的細胞活力數據,為“細胞質控"提供準確、客觀的統計學依據。

細胞活力檢測注意事項

檢測細胞活力時,需保證正常細胞的細胞膜是完整的。

核酸染料,如PI(Propidium iodide,碘化丙啶)常用于流式細胞儀分析。細胞在處于壞死或即將死亡的細胞細胞膜常處于受損狀態,由于PI不能通過正常完整的細胞膜,因此,細胞活力不佳的細胞,PI可將其染成紅色,用于分辨壞死細胞/正常細胞。

如果染色時再加入另一種能夠通過細胞膜的核酸染料,就可以將活細胞和死細胞區分開。

例如,PI經常被用來與Calcein-AM或者FDA等熒光探針一起使用,區別活力不同細胞。

細胞活力檢測的其他應用

除了對細胞進行常規的質量檢測,細胞活力測定還有其他更廣泛的應用。

例如,細胞活力是細胞毒性實驗的指標之一。判斷某種外源成分(化合物、小分子藥物或蛋白質等)對細胞是否存在毒性或毒性的高低,首先要觀察的,就是該成份是否會誘導細胞死亡,也就是細胞活力的變化。

另外,除了細胞毒性研究,細胞質控在病毒感染或者RNA轉染的研究中發揮著重要作用。轉染/感染所用的試劑,或多或少會對細胞產生一定的負面影響。因此,在轉染之前,活細胞需要達到一定的比例才可以保證在轉染實驗的順利進行。

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高質量的細胞培養,離不開優質胎牛血清的支持。胎牛血清在細胞培養中,發揮著以下幾個主要作用:

1、提供對維持細胞指數生長的激素,基礎培養基中沒有或量很少的營養物,以及主要的低分子營養物。

2、提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結合或調節它們所結合的物質活力。

3、有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合,起到解毒作用。

4、是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。

5、起酸堿度緩沖液作用。

6、提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。

7、參與細胞凍存。

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